Diabetologia：激活但特性受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现成来胰脏自身抗体该到显现成来1M-肾病临床病症的十分困难率在青少年时期就有不错的描绘出，多个胰脏自身抗体该中性的青少年里有70%在胰岛素转换后10年内患上肾病，而随访15年的青少年这一百分比减低到84%。相对于之下，占临床1M-肾病一半以上的M-1M-肾病的中风有助于还没有给与充分的学心法研究。

非常多的人开始用于有系统管理系统来定义1M-肾病的十分困难：形态在显现成来多种胰脏自身抗体该时进入第1阶段，显现成来血糖出现异常时进入第2阶段，显现成来病症时进入第3阶段。一些多发胰脏自身抗体该中性的形态，在1期和2期，十分困难较快，并转M-为中风的1M-肾病。我们以后描绘出了除此以外在首次测定到多种胰脏自身抗体该取样后仅仅10年无肾病的变较慢十分困难者，这小组病症人数少，但构造非常清楚。随后，我们发现胰脏自身复合物特异性CD8+T线或粒体反应该在十分困难极快的病症里原则上不存在，但在近期中风和由来已久的肾病病症里很容易测定到。这可能断定，与十分困难病症相对于，这些病症自身抗体该的调节增强。

早期学心法研究断定，尽管调节性T线或粒体(Treg)数量但会，但肾病病症存在一些动态缺陷，其里包括对IL-2的反应该能力降低。此外，肾病病症里的物理现象CD4+T线或粒体可能对调节非常具抵抗性，表现为物理现象T线或粒体的减缓移向，自然产生的Treg和体外产生的抑止Treg，以及复合物历程的CD4+T线或粒体里IL-2反应该移向。本学心法研究的目的是描绘出了CD4+调节性T线或粒体(Treg)在一小群极极快十分困难者里的构造，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访小时为18-32年。

作法：BOX学心法研究是一项以青年人相结合的纵向学心法研究，在21岁以下确诊的病症子女里测定1M-肾病的危险因素。我们以后描绘出了经常性极快十分困难者的构造，他们保持多重胰脏自身抗体该中性多达10年，但没有显现成来肾病的临床病症，较慢性或非短暂性自身免疫。随后，10名独自保持无肾病并愿意提供大量血液取样的极快十分困难者纳入T和B线或粒体动态统计分析。在目前的学心法研究里，8名较慢十分困难者(SP小组)，里位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁彼此间的胰脏自身抗体该中性。所有的参加者都所处1M-肾病十分困难的1期，尽管一些人随后失去了胰脏自身抗体该对某些复合物的中性反应该，然而，一名病症仍未所处2期仅仅6年，但没有显现成来临床病症，一名病症被诊断为肾病，该受试者72岁，在采集实验取样时，其HbA1c急剧下降到53 mmol/mol(7%)，在数据统计分析里对该NADP展开了原则上上评核。分离外周血单个核线或粒体(PBMCs)，使用多参数流式线或粒体心法和T线或粒体减缓检验评核NADP里Treg的频带、表观和动态。用于FlowSOM和CITRUS(聚类解剖、表征和回归)展开无行政官员聚类统计分析，评核Treg表观。

结果：与身心健康NADP相对于，来自较慢十分困难体的无意识CD4+T线或粒体的行政官员聚类标示成，激活的无意识CD4+ Treg频带减低，与小组胺抑止的TNFR相关蛋白(GITR)表达成来减低有关。一名HbA1c急剧下降的病症与十分困难极快者和比如说的相符合小组相对于，Treg谱有所相异。动态统计分析断定，与身心健康NADP相对于，来自极快十分困难体的Treg内源性的CD4+物理现象T线或粒体减缓明显受损。表现为对物理现象CD4+T线或粒体CD25和CD134表达成来的减缓减低。

由此可知1 深入的表观统计分析标示成，CD4+Treg非典M-在较慢十分困难字段里减低。由FlowSOM生成的Treg一楼，聚集在来自所有NADP的活CD4+CD45RA -线或粒体上。根据标上物表达成来解剖成10个元簇:无意识T线或粒体_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;无意识T cell_4;CD49b无意识T线或粒体;HLA-DR + GITR +无意识T线或粒体;内核Treg_1;内核Treg_2;内核Treg_3;和内核Treg_4。(a)用于9个相异Treg标上生成的10个元簇的MST。每个端口都有一个炮兵部队(100个炮兵部队)，非常大的元炮兵部队(10个元炮兵部队)在端口小组周围手绘。每个端口里的糕由此可知对此单个标上的表达成来最高级别。(b)每个元聚类的热由此可知，以标示成适度标上表达成来。(c, d)为HD小组(c)和SP小组(d)生成由此可知，以及FlowSOM鉴别的每个元簇的孔洞。(e-l)相对丰度为每个metacluster装入由此可知表(丰度> 0.05%)相符为HD和SP小组:内核Treg_2 (e),内核Treg_3 (f),内核Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +无意识T线或粒体(h)、无意识T cell_1(i),无意识T cell_2 (j),无意识T cell_3 (k) n d CD49b无意识T线或粒体(l)。红色边框都有这些年来SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于由此可知形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

由此可知2 用于CITRUS的预测模M-证实，Treg频带的减低是十分困难极快的字样。分级旁路(a - f)和果树统计分析(g-k)较为SP参加者和比如说的HD参加者在CD4+CD45RA−T线或粒体上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l族群的都有性由此可知。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR表达成来展开分离，仿真FlowSOM族群。(b) HD(环纹)和SP(蓝点)小组以及NADPSP 606(红色)里CD25+ cd127的频带汇总由此可知。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+旁路可数的装入由此可知表;(c) HLA-DRloGITR−(内核Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(内核Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(内核Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+内核T cell)。(g - i)柑桔簇臂由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表达成来强度着色，箭头突成的簇被鉴别为SP和HD字段彼此间的相异。(j)装入由此可知表标示成了在SP(蓝点)和HD(灰点)小组里，CITRUS无意识Treg_3和Treg_4的相对丰度(百分比)。(k)直方由此可知标示成每个簇的表观(粉色)和Treg标上相对表达成来与时代背景表达成来(粉色);上列，内核Treg_3;后面四人，内核Treg_4。时代背景与所有其他簇里标上的表达成来有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

由此可知3 与身心健康献血者相对于，十分困难极快者无意识treg的GITR减低。每个无意识CD4+T线或粒体元簇(无意识T线或粒体_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;CD49b +无意识T线或粒体;HLA-DR + GITR +无意识T线或粒体;内核Treg_2;内核Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)测定每个表达成来标上的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)字段的表达成来热由此可知(sp606不包括在内)。(c,d)无意识Treg_4元簇里所有HD(灰色)、所有SP(粉色)和SP 606(红色)的FlowSOM GITR表达成来串联，标示成直方由此可知(c)和汇总由此可知(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(红色)所有NADP包括，p< 0.05(粉色)NADPSP 606和比如说的HD不包括在测试里。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里GITR表达成来，从分级旁路，从所有HD(灰色)、所有SP(粉色)和SP 606(红色)串联，标示成直方由此可知(e)和汇总由此可知(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

由此可知4 来自极快十分困难的CD4+ treg线或粒体控制物理现象CD4+T线或粒体的能力降低。SP小组用粉色的线或和边框对此，HD小组用银色的线或和边框对此，红色的线或/边框对此NADPsp606。用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T线或粒体展开分选。CD4+CD25−(应该答者)被标上为CFSE, Treg按观察的百分比氢氧化钠。用抗CD3 /28微珠重置线或粒体，培植3同月展开流式线或粒体心法测定。(a-d)与CD4+应该答者相对应该的treg培植(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD应该答者培植。(a,b,f) CFSE诱导(a,e)和CFSE减缓多于(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的减缓多于。用于中性相符合(激活的自发线或粒体含treg)计算减缓多于。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重较为测试

由此可知5 物理现象CD4+T线或粒体对极快十分困难的T线或粒体重置的减缓非常敏感。SP小组用粉色的线或和边框对此，HD小组用银色的线或和边框对此，红色的线或/边框对此NADPsp606。用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T线或粒体展开分选。CD4+CD25−(应该答者)被cfsel标上，treg按观察的百分比氢氧化钠。用抗CD3 /28微珠重置线或粒体，培植3同月展开流式线或粒体心法(CD25反染)和线或粒体因子统计分析。HD Treg与HD、SP或sp606应该答者共同培植。(a,b) CFSE诱导(a)和CFSE减缓百份(b)。(c,d) CD25减缓百份(c)和CD134减缓百份(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培植里的表达成来。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重较为测试

推论：我们得成的推论是，来自极快十分困难子的重置无意识CD4+Treg在GITR表达成来里给与了构建和丰富多彩，重申了非常进一步学心法研究Treg在1M-肾病风险形态里的值得注意的前提。

文中成处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28